

Набор реагентов сыворотка диагностическая поливалентная бруцеллезная сухая для реакции агглютинации (РА).
НАЗНАЧЕНИЕ
Сыворотка диагностическая поливалентная бруцеллёзная предназначена для идентификации бруцеллезного микроба, выделенного от больных людей, животных, из продуктов животноводства и др.
ПРИНЦИП МЕТОДА
Метод основан на взаимодействии клеток бруцеллёзного микроба с антителами, содержащимися в поливалентной бруцеллезной сыворотке с образованием агглютината, видимого невооруженным глазом, в реакции агглютинации (РА) на стекле и пробирочной РА.
Доставка
Условия возврата и обмена
АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Сыворотка диагностическая поливалентная бруцеллезная сухая получена из крови кроликов, гипериммунизированных культурой вакцинного штамма бруцеллезного микроба в S-форме, инактивированная формалином или кипячением. Консервант - кислота борная. Стабилизатор - сахароза и натрий серноватистокислый.
Аморфная масса белого цвета с розоватым или желтоватым оттенком.
Титр сыворотки в реакции агглютинации на стекле не менее 1:25, в пробирочной реакции агглютинации не менее 1.800.
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Работу с исследуемым материалом проводят в соответствии с СП 1.3.1285-03 "Безопасность работы с микроорганизмами І-ІІ групп патогенности (опасности) ".
ОБОРУДОВАНИЕ И РЕАГЕНТЫ
1. Вода дистиллированная;
2. Натрий хлористый;
3. Бактериологическая петля;
4. Предметные стёкла;
5. Пробирки стеклянные объёмом 16 мл;
6. Пипетки стеклянные объёмом 1, 5, 10 мл;
7. Чашки Петри;
8. Штативы для пробирок;
9. Холодильник;
10. Термостат.
ОБРАЗЦЫ
Объектом для исследования может быть клинический материал от людей и животных, пищевые продукты, вода, патологический материал и объекты внешней среды и др.
ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
Постановка реакции агглютинации на стекле.
В чашку Петри наносят каплю бруцеллезной сыворотки в разведении 1:25 и каплю 0,9 % раствора натрия хлорида (контроль). Расстояние между каплями должно быть не менее 30 мм. Платиновой петлей или стеклянной палочкой исследуемая культура, выращенная на эритрит агаре в течение 46-48 ч при температуре 37 °С, равномерно смешивается сначала с каплей 0,9 % раствора натрия хлорида, затем с сывороткой. Для ускорения выпадения агглютината рекомендуется легкое покачивание чашки Петри.
Постановка реакции агглютинации пробирочным методом.
Сыворотку растворяют в 1 мл стерильной дистиллированной воды. После растворения прозрачная или слегка опалесцирующая жидкость светловато-кремового или розовато-желтого цвета. Ампулы, в которых при растворении препарата обнаружены хлопья, не употреблять. Сыворотку разводят 0,9 % раствором натрия хлорида pH 7,2±0,1 с таким расчетом, чтобы получить последовательные двукратные разведения, начиная с 1:25 до титра, указанного на этикетке ампулы.
После растворения сыворотку можно хранить при температуре от 4 до 10 °С в течение 24 ч.
Культуру бруцеллезных микробов выращивают на питательной среде для выделения и культивирования бруцелл сухая (эритрит агар), в течение 46-48 ч при температуре 37 °С. Из выросших культур готовят взвесь бруцеллезных микробов в 0,9 % растворе натрия хлорида, соответствующую 10 МЕ стандартного образца мутности (ООО 42-28-85 П), соответствующего года выпуска, эквивалентные 1,7∙10 м.к/мл.
К 0,5 мл каждого разведения сыворотки добавляют по 0,5 мл бруцеллезной микробной взвеси, получают разведения сыворотки от 1:50 до удвоенного титра, указанного на этикетке ампулы.
Одновременно ставят контроли:
- контроль антигена - к 0,5 мл бруцеллезной микробной взвеси добавляют 0,5 мл 0,9 % раствора натрия хлорида;
- контроль сыворотки - к 0,5 мл сыворотки в разведении 1:25 добавляют 0,5 мл 0,9 % раствора натрия хлорида;
Штативы с пробирками тщательного встряхивают, инкубируют при температуре 37 °С в течение 18-22 ч, после чего проводят учет реакции агглютинации.
ОЦЕНКА И УЧЁТ РЕЗУЛЬТАТОВ
Учет результатов реакции агглютинации на стекле
Реакцию агглютинации на стекле считают положительной при появлении в течение 2-3 мин агглютината, ясно видимого невооруженным глазом. При отрицательной реакции смесь сыворотки с культурой остается равномерно мутной. Контроль культуры должен оставаться равномерно мутным.
Положительная реакция свидетельствует о наличии в исследуемом материале антигена бруцеллезного микроба.
Учет результатов реакции агглютинации пробирочным методом проводят по четырехкрестной схеме:
4 креста - крупно- или мелкозернистая агглютинация при полном просветлении
надосадочной жидкости;
3 креста - крупно- или мелкозернистая агглютинация при легкой опалесценции
надосадочной жидкости;
2 креста - слабая агглютинация, надосадочная жидкость непрозрачная;
1 крест - следы агглютинации, надосадочная жидкость непрозрачная.
Реакцию считают положительной, если ясно видна невооруженным глазом крупно- или мелкозернистая агглютинация не менее, чем на два креста. Исследуемая культура может быть отнесена к бруцеллам, если она даёт положительную РА в разведении не менее 1:800 при отрицательных контрольных реакциях. В контрольных пробирках (контроль сыворотки и контроль культуры) не должно быть агглютината и хлопьев. Если в контрольной пробирке с культурой и 0,9 % раствором натрия хлорида обнаруживается агглютинат, реакция расценивается как неспецифическая. В таком случае реакцию агглютинации повторяют, отбирая для этого только типичные колонии в S-форме.
ФОРМА ВЫПУСКА
По 1 мл в ампуле. Упаковка содержит 10 ампул, Инструкцию по применению и нож ампульный.
СРОК ГОДНОСТИ. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ
Срок годности -3 года. Сыворотка с истекшим сроком годности применению не подлежит.
Сыворотку хранят и транспортируют в соответствии с СП 3.3.2.1248-03 при температуре от 2 до 8 °С.